Fiebre manchada de montañas rocosas: experiencia en 5 años de vigilancia activa en un hospital pediátrico de segundo nivel en el noreste de México / Rocky mountain spotted fever: five years of active surveillance experience in a second level pediatric hospital in northeastern Mexico

Resumen: Introducción: La fiebre manchada de las montañas rocosas (FMMR) es causada por Rickettsia rickettsii. En Coahuila, la región de la Comarca Lagunera se considera una zona endémica. No se han reportado casos en la zona sur del estado, específicamente en la ciudad de Saltillo. Métodos: Estudio prospectivo, reporte de casos. Se incluyeron los casos de niños atendidos en el Hospital del Niño Dr. Federico Gómez Santos en la ciudad de Saltillo, Coah., del mes de septiembre de 2012 a septiembre 2017 con diagnóstico confirmado clínicamente y por reacción en cadena de la polimerasa (PCR) de FMMR. Se presentan los antecedentes epidemiológicos, las características clínicas y evolución de los pacientes. Resultados: Se confirmaron 14 pacientes. La relación masculino:femenino fue de 1.8:1, la edad promedio de los pacientes fue de 7.6 años (18 meses a 13 años). El 42.8% de los pacientes refirió el contacto con perros y el 57.1% afirmó tener contacto con garrapatas. En todos los casos hubo fiebre y exantema purpúrico; alrededor del 70% manifestaron mialgias y artralgias; el 28% tuvo sangrado del tubo digestivo, y el 11% alteraciones neurológicas graves. El 64.2% de los casos recibió tratamiento adecuado con doxiciclina. Fallecieron 8 pacientes, con una tasa de letalidad de 57.1%. Conclusiones: La zona sur de Coahuila debe considerarse una zona endémica para FMMR. El retraso en el diagnóstico y tratamiento favorecen una mayor letalidad.

Abstract: Background: Rocky Mountain Spotted Fever (RMSF) is caused by Rickettsia rickettsii. In Coahuila, Comarca Lagunera is considered an endemic zone; no cases have been reported in the southern zone of the state, specifically in the city of Saltillo­. Methods: Prospective study, cases report. Children evaluated in the Hospital del Niño Dr. Federico Gómez Santos from September 2012 to September 2017, with clinically and laboratory (by polymerase chain reaction, PCR) confirmed diagnosis of FMMR were included. The epidemiological antecedents, clinical characteristics and patient's evolution are presented. Results: 14 patients were confirmed. The male: female ratio was 1.8: 1, the average age of the patients was 7.6 years (18 months to 13 years). 42.8% reported contact with dogs and 57.1% confirmed contact with ticks. In all cases, there was fever and purpuric rash; around 70% manifested myalgias and arthralgias; 28% presented digestive tract bleeding and 11% had severe neurological alterations. 64.2% of the cases received adequate treatment with doxycycline. Eight patients died with a case fatality rate of 57.1%. Conclusions: The southern zone of Coahuila should be considered an endemic area for FMMR. The delay in diagnosis and treatment favor a greater lethality.

Una serie de casos fatales de fiebre manchada de las Montañas Rocosas en Sonora, México / A fatal case series of Rocky Mountain spotted fever in Sonora, México

Resumen Introducción. La fiebre manchada de las Montañas Rocosas es una infección muy letal, particularmente si no se diagnostica y se trata oportunamente. Objetivo. Describir el perfil clínico de los casos fatales de pacientes con fiebre manchada de las Montañas Rocosas, hospitalizados en Sonora, México. Materiales y métodos. Se analizó una serie de 47 defunciones por fiebre manchada de las Montañas Rocosas en el periodo de 2013 a 2016. El diagnóstico se confirmó mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR) o la cuadruplicación de los títulos de inmunoglobulina G (IgG) en muestras de suero pareadas analizadas mediante inmunofluorescencia indirecta. Se compararon las características clínicas y de laboratorio, estratificando a los sujetos en dos grupos: pediátricos y adultos. Resultados. No hubo diferencias en las manifestaciones clínicas entre los grupos; el exantema petequial fue el signo más frecuente (96 %), seguido por cefalea (70 %) y mialgias (67 %). La muerte ocurrió en el 55 % de los sujetos a pesar de haber recibido doxiciclina antes del quinto día del inicio de los síntomas. Los marcadores de laboratorio más frecuentes fueron trombocitopenia, falla hepática e insuficiencia renal. Conclusión. La fiebre manchada de las Montañas Rocosas es una enfermedad muy letal, lo cual puede estar relacionado con la ausencia de sospecha del diagnóstico y el retraso en la administración de doxiciclina, pero también con características atribuibles a Rickettsia rickettsii que inciden en la variabilidad de los resultados adversos que se han observado en regiones donde la enfermedad es frecuente.

Abstract Introduction: Rocky Mountain spotted fever is a highly lethal infectious disease, particularly if specific treatment with doxycycline is given belatedly. Objective: To describe the clinical profile of fatal Rocky Mountain spotted fever cases in hospitalized patients in the state of Sonora, México. Materials and methods: We conducted a cross-sectional study on a series of 47 deaths caused by Rickettsia rickettsii from 2013 to 2016. The diagnosis of Rocky Mountain spotted fever was confirmed in a single blood sample by polymerase chain reaction (PCR) or by a four-fold increase in immunoglobulin G measured in paired samples analyzed by indirect immunofluorescence. Clinical and laboratory characteristics were compared stratifying subjects into two groups: pediatric and adult. Results: There were no differences in clinical characteristics between groups; petechial rash was the most frequent sign (96%), followed by headache (70%) and myalgia (67%). Although that doxycycline was administered before the fifth day from the onset of symptoms, death occurred in 55% of patients. In clinical laboratory, thrombocytopenia, and biomarkers of liver acute failure and acute kidney failure were the most frequent. Conclusion: Rocky Mountain spotted fever remains as one of the most lethal infectious diseases, which may be related not only to the lack of diagnostic suspicion and delayed administration of doxycycline, but to genotypic characteristics of Rickettsia rickettsii that may play a role in the variability of the fatality rate that has been reported in other geographical regions where the disease is endemic.

Investigação sorológica de Rickettsia rickettsii e Coxiella burnetii em caprinos e ovinos no entorno do Parque Nacional da Serra das Confusões, Piauí / Infection survey of Rickettsia rickettsii and Coxiella burnetii in sheep and goats from National Park of Serra das Confusões, Piauí

As doenças causadas por bactérias dos gêneros Rickettsia e Coxiella possuem como vetores artrópodes hematófagos, na sua maioria carrapatos, que atuam diretamente na transmissão de patógenos responsáveis por enfermidades de grande impacto na medicina veterinária e humana. O presente estudo objetivou realizar uma investigação sorológica de Rickettsia rickettsii e Coxiella burnetii em caprinos e ovinos criados no entorno do Parque Nacional da Serra das Confusões (PNSC), localizado no estado do Piauí, região nordeste do Brasil. Amostras de soro de 202 caprinos e 153 ovinos foram testadas pela Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) para detecção de anticorpos anti-R. rickettsii e anti-C. burnetii, sendo consideradas positivas quando apresentaram títulos ≥ 64. Carrapatos em fase de parasitismo foram coletados e identificados. Todas as amostras de caprinos e ovinos foram soronegativas para antígenos de R. rickettsii. Foi verificado soropositividade em 2% (3/153) das amostras de ovinos para C. burnetii, com títulos variando de 64 a 4.096. As amostras de caprinos não foram reagentes ao referido antígeno. Não foi observado parasitismo em caprinos por carrapatos. No total, foram coletados 56 carrapatos parasitando 15 ovinos (9,8%), todos identificados como Rhipicephalus microplus. O estudo demonstrou a ausência de anticorpos anti-R. rickettsii nas amostras de caprinos e ovinos, ausência de anticorpos anti-C. burnetii em caprinos; e possibilitou o primeiro relato da ocorrência sorológica de C. burnetii em ovinos nesta região do Brasil.(AU)

The diseases caused by bacteria from the genera Rickettsia and Coxiella have hematophagous arthropods as vectors, mostly by ticks, which act directly on the transmission of pathogens that are responsible for diseases with major impact on veterinary and human medicine. The present study aimed to survey the infection of Rickettsia rickettsii and Coxiella burnetii in sheep and goats surrounding in the National Park of Serra das Confusões (NPSC), located in the state of Piauí, Northeast of Brazil. Serum samples from 202 goats and 153 sheep were tested by Indirect Immunofluorescence Assay (IFA) for the detection of antibodies against R. rickettsii and C. burnetii. The samples were considered positive when they showed titers ≥ 64. Ticks in parasitic stage were collected and identified. All samples from sheep and goats were seronegative for R. rickettsii. Seropositivity was verified in 2% (3/153) of the samples of sheep for C. burnetii, with titers ranging from 64 to 4096. The serum samples obtained from goats were seronegative to the above antigens. In total, 56 ticks were collected from 15 sheep (9.8%) all identified as Rhipicephalus microplus. The study demonstrated absence of infection by R. rickettsii in samples of sheep and goats, absence of infection of C. burnetii in goats; and the first report of serological occurrence of C. burnetii in sheep in this region of Brazil.(AU)

Fiebre manchada grave por Rickettsia rickettsii en turista en el Noroeste Argentino / Severe spotted fever by Rickettsia rickettsii, in tourist in the Argentine Northwest

Al quinto día de retirarse del Parque Nacional El Rey, provincia de Salta, Argentina, donde realizó turismo rural, una mujer italiana de 47 años desarrolló un cuadro febril agudo seguido de un exantema petequial y purpúrico que progresó rápidamente a falla multiorgánica y falleció al sexto día de internación. Existieron referencias a mordeduras por garrapatas y se constató una lesión cutánea similar a la denominada tache noire. La autopsia mostró una vasculitis generalizada, ascitis, edema de pulmón, necrosis tubular aguda y necrosis portal centrolobulillar. Se procesó tejido esplénico y hepático con técnica de PCR para Rickettsia spp, basada en la detección del gen gltA. El resultado fue positivo. Los amplicones obtenidos fueron secuenciados y los resultados se compararon con las secuencias preestablecidas en el programa BLAST, coincidiendo en un 99% con R. rickettsii. La baja sensibilidad del sistema de salud en reconocer la enfermedad y la insuficiente información producida desde los medios relacionados con el turismo, son factores que inciden en el retardo de implementar un tratamiento eficaz y las normas de prevención adecuadas.

On the fifth day after leaving the Parque Nacional El Rey, province of Salta, Argentina, where she made rural tourism, a woman of Italian origin, aged 47, developed an acute fever followed by a petechial and purpuric rash that progressed rapidly to multiorgan failure. She died on the sixth day after hospitalization. There were references to tick bites and a skin lesion similar to tache noire was found. The autopsy showed generalized vasculitis, ascites, pulmonary edema, acute tubular necrosis and portal centrilobular necrosis. Spleen and liver tissue were processed for PCR Rickettsia spp, based on the detection of the gltA gene. The result was positive. The amplicons obtained were sequenced and the results were compared with the preset sequences on the BLAST program, 99% coinciding with R. rickettsii. The low sensitivity of the health system to recognize this disease and the insufficient information generated from tourism-related media are factors that affect the delay to implement effective treatment and appropriate prevention standards.

Environmental infestation and rickettsial infection in ticks in an area endemic for brazilian spotted fever / Infestação ambiental e infecção por rickéttsias em carrapatos de área endêmica para Febre Maculosa Brasileira

Brazilian spotted fever (BSF), caused by Rickettsia rickettsii, is endemic in the municipality of Americana, southeastern Brazil, where the disease is transmitted by the tick Amblyomma cajennense. This study evaluated the tick fauna and rickettsial infection in free-living ticks that were captured monthly using dry ice traps in areas endemic for BSF in Americana, from July 2009 to June 2010. Two tick species were captured: A. cajennense (6,122 larvae; 4,265 nymphs; 2,355 adults) and Amblyomma dubitatum (7,814 larvae; 3,364 nymphs; 1,193 adults). The immature stages of A. cajennense and A. dubitatum had similar distribution through the 12-month period, with larvae of both species collected in highest numbers between April and July, and nymphs between June and October. The highest numbers of A. cajennense adults were collected between October and December, whereas A. dubitatum adults were collected in relatively similar numbers throughout the 12-month period. Rickettsial infection was evaluated by means of PCR in 1,157 A. cajennense and 1,040 A. dubitatum ticks; only 41 (3.9%) A. dubitatum were found to be infected by Rickettsia bellii. The present study showed that the areas of Americana that are endemic for BSF are characterized by high environmental burdens of A. cajennense and A. dubitatum.

A Febre Maculosa Brasileira (FMB) é uma antropozoonose endêmica no município de Americana/SP, causada pela bactéria Rickettsia rickettsii e transmitida pelo carrapato Amblyomma cajennense. Este estudo avaliou a fauna de carrapatos e a infecção por riquétsias em carrapatos de vida livre capturados mensalmente com armadilhas de CO2, em áreas de risco para FMB de Americana, de julho de 2009 a junho de 2010. Duas espécies foram capturadas, A. cajennense (6.122 larvas; 4.265 ninfas; 2.355 adultos) e Amblyomma dubitatum (7.814 larvas; 3.364 ninfas; 1.193 adultos). Os estágios imaturos de A. cajennense e A. dubitatum apresentaram uma distribuição anual semelhante, com larvas de ambas as espécies sendo coletadas em maior número no período de abril a julho e ninfas de junho a outubro. Maior número de adultos de A. cajennense foi coletado de outubro a dezembro, enquanto que os adultos de A. dubitatum foram coletados em número relativamente semelhante durante todo o ano. A infecção por Rickettsia foi avaliada pela PCR em 1157 carrapatos A. cajennense e 1040 A. dubitatum, com apenas 41 (3,9%) A. dubitatum infectados com Rickettsia bellii. Este estudo demonstrou que as áreas de risco para FMB de Americana são caracterizadas por elevadas infestações ambientais de A. cajennense e A. dubitatum.

A febre maculosa no Brasil / Rocky Mountain spotted fever in Brazil

Embora no Brasil o número de casos confirmados de febre maculosa esteja em declínio desde 2005, a taxa de mortalidade (20 a 30 por cento) ainda é muito alta quando comparada a outros países. Esse alto índice de mortalidade tem estreita relação com a dificuldade em fazer o diagnóstico e estabelecer a terapia apropriada. Apenas dois grupos de antibióticos têm comprovada eficácia clínica, o cloranfenicol e as tetraciclinas. Até pouco tempo atrás, as tetraciclinas eram reservadas aos pacientes adultos em virtude das alterações dentárias e ósseas em crianças. Recentemente, entretanto, a Academia Americana de Pediatria e diversos autores têm recomendado a utilização da doxiciclina também em crianças. Em casos mais severos, a falta de experiência com uma tetraciclina injetável no Brasil faz com que se opte pelo cloranfenicol injetável. Como o pronto diagnóstico e a escolha adequada do fármaco são fatores determinantes de um prognóstico positivo, todos os profissionais da saúde devem estar melhor preparados para reconhecer e tratar a febre maculosa.

Although the number of confirmed cases of spotted fever has been declining in Brazil since 2005, the mortality rate (20 percent to 30 percent) is still high in comparison to other countries. This high mortality rate is closely related to the difficulty in making the diagnosis and starting the correct treatment. Only two groups of antibiotics have proven clinical effectiveness against spotted fever: chloramphenicol and tetracyclines. Until recently, the use of tetracyclines was restricted to adults because of the associated bone and tooth changes in children. Recently, however, the American Academy of Pediatrics and various researchers have recommended the use of doxycycline in children. In more severe cases, chloramphenicol injections are often preferred in Brazil because of the lack of experience with injectable tetracycline. Since early diagnosis and the adequate drug treatment are key to a good prognosis, health care professionals must be better prepared to recognize and treat spotted fever.

First identification of natural infection of Rickettsia rickettsii in the Rhipicephalus sanguineus tick, in the State of Rio de Janeiro / Primeira identificação de infecção natural por Rickettsia rickettsii no carrapato Rhipicephalus sanguineus no Rio de Janeiro

The Brazilian Spotted Fever (BSF) is a zoonotic disease caused by Rickettsia rickettsii and transmitted by ticks of the genus Amblyomma, more frequently, Amblyomma cajennense. The aim of this paper was to report the first molecular detection of R. rickettsii on R. sanguineus naturally infected in Rio de Janeiro, Brazil. Ticks were collected from dogs in a rural region of Resende municipality, Rio de Janeiro State, Brazil (22º30'9.46"S, 44º42'44.29"WO), where occurred five human cases of BSF in 2006. The ticks were identified under a stereoscopic microscope and separated in pools by stages, species and sex. DNA extraction was carried out using QIAamp DNA Mini Kit (QIAGEN®). The DNA was submitted to PCR amplification using 04 set of primers: Rr190.70p/Rr190.602n (OmpA, 532bp), BG1-21/BG2-20 (OmpB, 650bp), Tz15/Tz16 (17 kDa protein-encoding gene, 246bp) and RpCS.877p/RpCS.1258n (gltA, 381bp). PCR products were separated by electrophoresis on 1 percent agarose gels and visualized under ultraviolet light with ethidium bromide. PCR products of the expected sizes were purified by QIAquick® and sequenced by ABI PRISM®. The generated nucleotide sequences were edited with using Bioedit® software and compared with the corresponding homologous sequences available through GenBank, using Discontiguous Mega Blast (http://www.ncbi.nlm.nih.gov). It was confirmed R. rickettsii by sequencing of the material (GenBank FJ356230). The molecular characterization of R. rickettsii in the tick R. sanguineus emphasizes the role of dogs as carriers of ticks from the environment to home. Moreover, this result suggests that there is a considerable chance for active participation of R. sanguineus as one of tick species in the transmission of R. ricketsii to human being in the Brazilian territory.

A Febre Maculosa Brasileira (FMB) é uma zoonose causada por Rickettsia rickettsii e transmitida por carrapatos do gênero Amblyomma, mais freqüentemente pela espécie Amblyomma cajennense. Este trabalho tem como objetivo relatar a primeira detecção molecular de R. rickettsii em Rhipicephalus sanguineus naturalmente infectado no Rio de Janeiro, Brasil. Carrapatos foram coletados de cães, procedentes de uma região rural do município de Resende, estado do Rio de Janeiro, Brasil (22º30'9.46"S, 44º42'44.29"WO), onde ocorreram cinco casos humanos de FMB em 2006. Todos os carrapatos foram identificados segundo chave dicotômica, utilizando-se lupa estereoscópica e separados de acordo com estágio, espécie e sexo. Para a extração de DNA utilizou-se o kit comercial QIAamp DNA (QIAGEN ®). O DNA foi submetido à técnica de PCR utilizando 04 conjuntos de iniciadores para a amplificação dos genes: Rr190.70p/Rr190.602n (OmpA, 532bp), BG1-21/BG2-20 (OmpB, 650bp), Tz15/Tz16 (17 kDa gene que codifica a proteína, 246bp) e RPCs .877p/RpCS.1258n (gltA, 381bp). Os produtos da PCR foram separados por eletroforese em gel agarose 1 por cento corados com brometo de etídio e visualizados sob luz ultravioleta e, aqueles que apresentaram bandas amplificadas foram purificados utilizando-se o kit comercial QIAquick ® e seqüenciados pelo ABI PRISM®. As seqüências nucleotídicas foram geradas usando Bioedit®, editado em software e comparados os correspondentes homólogos com as sequências disponíveis através GenBank, utilizando Discontiguous Mega Blast (http://www.ncbi.nlm.nih.gov). Confirmou-se R. rickettsii (GenBank FJ356230) no seqüenciamento de apenas um espécime, adulto de carrapato R. sanguineus. A caracterização molecular de R. rickettsii em exemplar de carrapato R. sanguineus confirma que esta espécie pode ter importante papel na transmissão de R. rickettsii para humanos no território brasileiro.

Pesquisa de anticorpos anti-Rickettsia rickettsii em eqüinos do Centro de Controle de Zoonoses do município de São Paulo (CCZ/SP) / Detection of antibodies against Rickettsia rickettsii in equines of the Zoonosis Control Center of São Paulo Municipality (CCZ/SP)

A Febre Maculosa Brasileira (FMB) é uma zoonose transmitida por pelo menos duas espécies de carrapatos: Amblyomma cajennense e Amblyomma aureolatum. Os eqüinos assumem um importante papel de sentinela da FMB em áreas onde o carrapato vetor é o A. cajennense,por ser considerado hospedeiro primário dessa espécie de carrapato. O A. aureolatum, cujos hospedeiros primários são aves, alguns roedores silvestres e canídeos, é incriminado como vetor da doença na região da Grande São Paulo. Este trabalho objetivou pesquisar a presença de anticorpos contra Rickettsia rickettsii, agente da FMB, em eqüinos encaminhados ao Centro de Controle de Zoonoses do município de São Paulo (CCZ/SP) no período de 2003 a 2005. Após coleta de sangue, o soro obtido pela centrifugação foi submetido à reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e os animais foram considerados positivos quando as amostras de soro apresentaram títulos ≥ 64. Durante os três anos, foram testados 363 amostras pela RIFI, sendo que 64 se mostraram reagentes: 6 (2003), 16 (2004) e 42 (2005). Os títulos finais variaram de 64 a 1.024. Os resultados obtidos demonstram uma baixa porcentagem de animais reagentes (17,6%) quando comparados com dados de literatura de áreas endêmicas para FMB onde o vetor é o A. cajennense, sugerindo não ser essa espécie responsável pela transmissão da doença na área de estudo

Brazilian Spotter Fever (BSF) is a tick-borne zoonosis transmitted byat least two tick species: Amblyomma cajennense and Amblyomma aureolatum. In areas where the tick vector is A. cajennense, equines are important for being considered primary hosts of this tick species. A. aureolatum, whose primary hosts include birds, some rodent species, and dogs, is incriminated as vector in the metropolitan region of São Paulo city. This work aimed to detect antibodies reactive to Rickettsia rickettsii in equines sent to the Zoonosis Control Center of São Paulo Municipality (CCZ/SP) during the period from 2003 to 2005. After blood collection, sera were obtained by centrifugation and tested by the indirect immunofluorescence assay (IFA) and animals were considered positive if sera presented titers ≥ 64. During three years, 363 equine sera sent to CCZ/SP, were tested by IFA, and 64 showed reactive: 6 (2003), 16 (2004) and 42 (2005). The end-point titers varied from 64 to 1.024. The results demonstrate a low percentage (17.6%) of reactive animals, when compared with literature data from BS Fendemic areas where A. cajennense is the vector, suggesting that this tick is not a main vector in the study area.

Detection of Rickettsia rickettsii in the tick Amblyomma cajennense in a new brazilian spotted fever - endemic area in the state of Minas Gerais

The present study evaluated rickettsial infection in Amblyomma spp. ticks collected in a farm in Coronel Pacheco, a Brazilian spotted fever (BSF) endemic area. A total of 78 A. cajennense and 78 A. dubitatum free-living adult ticks were collected and tested by polymerase chain reaction (PCR) targeting a fragment of the rickettsial gene gltA. Only one pool of three A. cajennense ticks showed the expected product by PCR. This pool was further tested by PCR using sets of primers targeting the rickettsial genes gltA, ompA, and ompB. All reactions yielded the expected bands that by sequencing, showed 100 percent identity to the corresponding sequences of the Rickettsia rickettsii gene fragments gltA (1063-bp), ompA (457-bp), and ompB (720-bp). The minimal infection rate of R. rickettii in the A. cajennense population was 1.28 percent (at least one infected tick within 78 ticks).The present study showed molecular evidence for the presence of R. rickettsii in A. cajennense from a BSF-endemic area in Coronel Pacheco, state of Minas Gerais. Although R. rickettsii has been previously reported infecting A. cajennense ticks in Brazil and other Latin American countries, the present study performed the first molecular characterization of R. rickettsii from the tick A. cajennense.

Isolamento de Rickettsia em cultura de células vero / Isolation of Rickettsia in vero cell culture

Embora o diagnóstico da febre maculosa baseie-se em sinais e sintomas característicos, o mesmo requer confirmaçäo laboratorial, pois existem alguns diagnósticos diferenciais possíveis como meningococcemia, leptospirose, infecçäo por enterovírus e febre tifóide. A confirmaçäo laboratorial pode ser feita através da pesquisa de anticorpos específicos, possível somente alguns dias após o aparecimento da doença, através do isolamento do agente em amostras de sangue e/ou biópsia de pele, e ainda, de amostras de carrapatos coletados do paciente ou de animais reservatório. O isolamento a partir de sangue ou biópsia de pele resulta em diagnóstico precoce da doença, pois na fase de rickettsemia ainda näo há anticorpos detectáveis no sangue. Assim, com o objetivo de facilitar o diagnóstico precoce da febre maculosa, estabelecemos um método de isolamento de rickettsia em cultura de células vero. Para a padronizaçäo foi inoculada amostra padräo de Rickettsia rickettsii, cepa Sheyla Smith, cedida pelo CDC. A identificaçäo foi feita através da reaçäo de imunofluorescência indireta. A presença de microrganismos verdes fluorescentes visualizados no interior do citoplasma das células caracterizou o crescimento do agente. Posteriormente, a metodologia foi confirmada pelo isolamento do agente da febre maculosa em amostras de biópsia de pele de paciente proveniente de área endêmica no Estado de Säo Paulo, bem como, de amostras de carrapato do gênero Amblyomma, considerado o reservatório e transmissor da doença no Brasil